Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展到

从第一次显现人体内自身突变到显现1DF心血管疾病诊断征状的的发展率在成人时期就有很差的描绘，多个人体内自身突变HIV的成人中的有70%在血清转成后10年内患上心血管疾病，而随访15年的成人这一比例减少到84%。相相当来说之下，占诊断1DF心血管疾病一半以上的DF1DF心血管疾病的复发机制还未给与充分的研究者。

越来越多的人开始用于有系统系统来定义1DF心血管疾病的的发展：母体在显现多种人体内自身突变时转至第1阶段，显现胰岛素出现异常时转至第2阶段，显现征状时转至第3阶段。一些多发人体内自身突变HIV的母体，在1期和2期，的发展较慢，并发展为复发的1DF心血管疾病。我们以前描绘了一两组在首次检查到多种人体内自身突变样本后至较少10年无心血管疾病的太快的发展者，这两组病症人数较少，但基本特征非常确切。随后，我们找到人体内自身蛋白质特异性CD8+T细胞内反应在的发展平稳的病症中的基本不假定，但在近期复发和长期假定的心血管疾病病症中的很容易检查到。这可能表明，与的发展病症相相当来说，这些病症自身病原体的适度大幅提高。

更早研究者表明，尽管适度性T细胞内(Treg)数量正常，但心血管疾病病症假定一些动态缺陷，其中的包括对IL-2的反应能力也减小。此外，心血管疾病病症中的的effectCD4+T细胞内可能对适度更具抵抗性，观感为effectT细胞内的选择性向西移动，大自然产生的Treg和粘液产生的抑止Treg，以及蛋白质亲身经历的CD4+T细胞内中的IL-2反应向西移动。本研究者的目的是描绘了CD4+适度性T细胞内(Treg)在一小群极平稳的发展者中的的基本特征，他们的平均岁数为43岁(31-72岁)，随访短时间为18-32年。

方法：BOX研究者是一项以青年人为基础的纵向研究者，在21岁以下确诊的病症亲人中的检查1DF心血管疾病的小心因素。我们以前描绘了长期平稳的发展者的基本特征，他们保持多重人体内自身突变HIV最少10年，但未显现心血管疾病的诊断征状，慢性或非展开性自身免疫。随后，10名继续保持无心血管疾病并愿意提供大量血液样本的平稳的发展者纳入T和B细胞内动态比对。在现今的研究者中的，8名慢的发展者(SP两组)，中的位岁数43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此之间的人体内自身突变HIV。所有的行动者都位处1DF心血管疾病的发展的1期，尽管一些人随后失去了人体内自身突变对某些蛋白质的HIV反应，然而，一名病症以前位处2期至较少6年，但未显现诊断征状，一名病症被检验为心血管疾病，该实验者72岁，在野外实验样本时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在数据比对中的对该丝氨酸展开了单独评估。分立外周血单个核细胞内(PBMCs)，采用多给定流式细胞内练成和T细胞内选择性试验评估丝氨酸中的Treg的频谱、遗传基因和动态。用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴别、表征和紧接著)展开无指派聚类比对，评估Treg遗传基因。

结果：与心理健康丝氨酸相相当来说，来自慢的发展体的心灵CD4+T细胞内的指派聚类看显现出，介导的心灵CD4+ Treg频谱减少，与免疫抑制抑止的TNFR相关蛋白(GITR)隐含减少有关。一名HbA1c急剧下降的病症与的发展平稳者和匹配的控制两组相相当来说，Treg谱有所不同。动态比对表明，与心理健康丝氨酸相相当来说，来自平稳的发展体的Treg介导的CD4+effectT细胞内选择性明显损害。观感为对effectCD4+T细胞内CD25和CD134隐含的选择性减少。

三幅1 集中的的遗传基因比对看显现出，CD4+Treg冠状病毒在慢的发展队列中的减少。由FlowSOM生成的Treg寝室，聚集在来自所有丝氨酸的活CD4+CD45RA -细胞内上。根据记号物隐含鉴别显现出10个元簇:心灵T细胞内_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T细胞内;HLA-DR + GITR +心灵T细胞内;文件系统Treg_1;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;和文件系统Treg_4。(a)用于9个不同Treg记号生成的10个元簇的MST。每个路由代表一个空降兵(100个空降兵)，更大的元空降兵(10个元空降兵)在路由两组区域内着色。每个路由中的的饼三幅回应单个记号的隐含级别。(b)每个元聚类的热三幅，以看显现出既有记号隐含。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)生成三幅，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相相当同位素为每个metacluster箱线或三幅(同位素> 0.05%)已确定为HD和SP两组:文件系统Treg_2 (e),文件系统Treg_3 (f),文件系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T细胞内(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T细胞内(l)。蓝色圆点代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon相加符号秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 用于CITRUS的预测模DF断定，Treg频谱的减少是的发展平稳的标记。基准门控(a - f)和柑橘比对(g-k)相当SP行动者和匹配的HD行动者在CD4+CD45RA−T细胞内上的差别。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l母体的纪念性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR隐含展开分立，三维FlowSOM母体。(b) HD(黑点)和SP(白点)两组以及丝氨酸SP 606(蓝色)中的CD25+ cd127的频谱汇总三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控孙开集的箱线或三幅;(c) HLA-DRloGITR−(文件系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件系统T cell)。(g - i)龙眼簇螺旋形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含强度着色，箭头突显现出的簇被识别为SP和HD队列彼此之间的不同。(j)箱线或三幅看显现出了在SP(白点)和HD(灰点)两组中的，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的相相当同位素(比例)。(k)直方三幅看显现出每个簇的遗传基因(粉红色)和Treg记号相相当隐含与氛围隐含(蓝色);上列，文件系统Treg_3;比如说一行，文件系统Treg_4。氛围与所有其他簇中的记号的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon相加符号秩检验

三幅3 与心理健康献血者相相当来说，的发展平稳者心灵treg的GITR减少。每个心灵CD4+T细胞内元簇(心灵T细胞内_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T细胞内;HLA-DR + GITR +心灵T细胞内;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查每个隐含记号的改变。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的隐含热三幅(sp606不包括在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇中的所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(蓝色)的FlowSOM GITR隐含联接，看显现出直方三幅(c)和汇总三幅(d)。Wilcoxon相加符号秩和检验，p< 0.07(蓝色)所有丝氨酸包括，p< 0.05(蓝色)丝氨酸SP 606和匹配的HD不包括在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR隐含，从基准门控，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(蓝色)联接，看显现出直方三幅(e)和汇总三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon相加符号秩检验

三幅4 来自平稳的发展的CD4+ treg细胞内控制effectCD4+T细胞内的能力也减小。SP两组用蓝色的线或和圆点回应，HD两组用白色的线或和圆点回应，蓝色的线或/圆点回应丝氨酸sp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内展开分选。CD4+CD25−(应答者)被记号为CFSE, Treg按仔细观察的比例反应物。用抗CD3 /28微珠再生细胞内，培育3同一天展开流式细胞内练成检查。(a-d)与CD4+应答者相相当应的treg培育(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应答者培育。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE选择性多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性多于。用于HIV对照(介导的响应细胞内不含treg)计算选择性多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

三幅5 effectCD4+T细胞内对平稳的发展的T细胞内再生的选择性更敏感。SP两组用蓝色的线或和圆点回应，HD两组用白色的线或和圆点回应，蓝色的线或/圆点回应丝氨酸sp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内展开分选。CD4+CD25−(应答者)被cfsel记号，treg按仔细观察的比例反应物。用抗CD3 /28微珠再生细胞内，培育3同一天展开流式细胞内练成(CD25反染)和细胞内因孙子比对。HD Treg与HD、SP或sp606应答者共同培育。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE选择性三份(b)。(c,d) CD25选择性三份(c)和CD134选择性三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育中的的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

结论：我们给显现出的结论是，来自平稳的发展孙子的再生心灵CD4+Treg在GITR隐含中的给与了扩展和丰富，强调了进一步研究者Treg在1DF心血管疾病风险母体中的的异质性的必要性。

原文注解：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28